凝胶电泳为什么没有条带(凝胶电泳为什么没有条带显色)
本篇目录:
- 1、我们跑了变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后,没有看见条带,是跑的时间太长了么...
- 2、聚丙烯酰胺凝胶电泳跑蛋白质不出条带
- 3、SDS法提取植物基因组DNA,经琼脂糖凝胶电泳没有看到条带的原因,
- 4、SDS法提取植物基因组DNA经琼脂糖凝胶电泳没有带的原因有哪些
我们跑了变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后,没有看见条带,是跑的时间太长了么...
首先确认你的Loading Buffer中的溴酚蓝有没有跑出去。另外,不知你是跑的场强多大,如果是Mini胶的话216V,跑一个半小时肯定是跑出去了。
可能之一:蛋白分子量太高了,跑得时间不够,条带没有跑开。可能之二:染色没有染好。可能之三:制胶时没有抽气,导致胶不平。可能之四:蛋白降解严重。可以试试低温电泳。
电泳跑不出条带的原因可能有很多,以下是一些可能的原因: 样品中没有DNA,或者DNA太少,或者DNA已经降解。 DNA较小而电泳时间太长,导致DNA跑了出去。 DNA太大,还在加样孔附近,甚至还没有跑到胶里。
跑电泳时看不到结果可能有以下原因: 样品问题:样品可能没有充分提取或者制备过程中出现了问题,导致无法在电泳中显示出条带。
如果MARKER跑的出来很清晰,就不是胶的问题,我今天也碰到这个问题,有可能是引物不好,有可能体系不好,也有可能是天气原因,天气变化有可能显影需要的时间也不一样,如果体系,引物你都确定没有问题,就延长显影时间。
此外,还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的克隆操作。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段。
聚丙烯酰胺凝胶电泳跑蛋白质不出条带
如果marker中大分子量蛋白分离已经分开,而小分子量蛋白分不开,应该是胶浓度太低,孔径太大,所以25K和14K的蛋白所受阻力都太小,没有明显区别。可以增加分离胶浓度,一般15%左右就可以了。
如果不合适,仅调整分离胶的浓度的话,产物是看不出来的。你确定产物能跑出来?(打击你一下,有可能产物浓度过低,要知道SDSPAGE也是有分辨浓度问题的)有很多具体情况,建议你到丁香园上发这个帖子讨论吧。
蛋白用丙酮浓缩后跑电泳还是没有条带怎么办 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下, 对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,常用于同工酶的鉴定和提纯。
可能之一:蛋白分子量太高了,跑得时间不够,条带没有跑开。可能之二:染色没有染好。可能之三:制胶时没有抽气,导致胶不平。可能之四:蛋白降解严重。可以试试低温电泳。
你的胶还能凝吗?看你的叙述,好像胶是可以凝的,那样的话和丙烯酰胺或者TBE就关系不大了,更大的可能是你的样品降解了。Marker跑出来了吗?如果marker能跑出来,就可以确定和胶或者TBE完全没有关系。
SDS法提取植物基因组DNA,经琼脂糖凝胶电泳没有看到条带的原因,
1、植物细胞有细胞壁,提取过程可能未破碎完全,导致释放的DNA浓度过低而不能被电泳检测到 2样品降解:提取过程机械振动过于剧烈,基因组DNA链断裂,二是操作过程中DNase污染,降解了DNA,反复冻融DNA也可造成降解。
2、首先要排除琼脂糖凝胶配制的是否正确,如果齿孔不规则或残余凝胶颗粒则会使条带不规则;检查电泳槽的电极是否出现移位、歪斜;考虑更换电泳缓冲液;电压不要太高,否则凝胶会受热。
3、原因很简单。样品里的目的片段DNA量太少,所以没有检测到。
4、如果琼脂糖能正常凝固,那变质可能性不大。如果连marker都看不见 如果不要求回收而只是看带,TBE可以不用灭菌,但是PH值要调,这影响DNA的迁移率。很有可能你的marker都没跑开。
5、点样没点好或者制孔没制好,样品没提出DNA根据目的条带长度来调整凝胶浓度,一般5%左右,也不一定。紫外灯下没见带,不一定没有出孔,而是量少看不到,可以测一下浓度看一下,或直接试跑一下PCR。
6、条带短,能结合的EB(或其他染料)就少,所以相对长片段亮度就很弱,一般小于500就很难看清。解决方案,基本上楼上的都提到了:提高琼脂糖凝胶浓度到2%-3 跑个单酶切对照,有差异就表示有连接进去。
SDS法提取植物基因组DNA经琼脂糖凝胶电泳没有带的原因有哪些
1、植物细胞有细胞壁,提取过程可能未破碎完全,导致释放的DNA浓度过低而不能被电泳检测到 2样品降解:提取过程机械振动过于剧烈,基因组DNA链断裂,二是操作过程中DNase污染,降解了DNA,反复冻融DNA也可造成降解。
2、原因很简单。样品里的目的片段DNA量太少,所以没有检测到。
3、可能是荧光染料过期了或者用量不够,可以考虑在合适范围类适当加大用量或者用EB试试,EB毒性大,但是染色能力比低毒染料强。检查marker的保质期,单独跑一次marker,可能这个marker不行了。
4、首先要排除琼脂糖凝胶配制的是否正确,如果齿孔不规则或残余凝胶颗粒则会使条带不规则;检查电泳槽的电极是否出现移位、歪斜;考虑更换电泳缓冲液;电压不要太高,否则凝胶会受热。
5、加大上样量试试。另外,用试剂盒提取的话纯度都还算可以,自己手工提取的话会不会有降解或浓度太低了呢。不知道你的琼脂糖浓度是多少?我做的时候5%,我点2μL都会很亮,建议你用试剂盒提取试试。
6、点样空有没有东西?可能有蛋白污染,所以都堵在点样空,你看到的白色沉淀可能就是蛋白含量太高。2 操作太剧烈,活有DNase 污染,DNA都降解成小片段,跑出胶。
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